Pytlík R, Stehlík D, Soukup T, Kalbácová M, Rypácek F, Trč T, Mulinková K, Michnová P, Kideryová L, Zivný J, Klener P Jr, Veselá R, Trněný M, Klener P. Biomaterials. 2009 Jul;30(20):3415–27. Epub 2009 Apr 10. IF: 6.646
Velice úspěšný článek, který si můžete přečíst v časopise Biomaterials, popisuje vývoj protokolu, jenž umožňuje vysoce efektivní jednokrokové množení lidských multipotentních mesenchymálních stromálních buněk (hMSCs). Vzniklé buňky neobsahují heterologní proteiny a celý postup může být snadno použit k jejich produkci pro účely tkáňového inženýrství. Měl tedy být vyvinut protokol, který by zkrátil kultivační dobu a nevyžadoval vícenásobné pasážování. Byla porovnávána dvě kultivační media: alpha-MEM a CellGro medium pro hematopoetické buňky. Při použití podpůrného fetálního bovinního (FCS) či lidského séra a odstranění nepřilnavých buněk byla obě media srovnatelná. Při použití lidského séra bylo množství lidských multipotentních mesenchymálních stromálních buněk vyšší, pokud byly nepřilnavé buňky ponechány v kultuře. Přidání rekombinantních cytokinů a jiných podpůrných prostředků do CellGro media s lidským sérem vedlo k čtyřicetinásobnému výtěžku hMSCs oproti kultivaci v alpha-MEM s FCS. Vzniklé hMSCs si uchovaly svůj osteogenní, adipogenní a chondrogenní diferenciační potenciál in vitro a na 3D polyactidové kostře v imunodeficientních myších produkovaly kosti podobnou mineralizovanou tkáň.
Proč byla vybrána právě kultivační media CellGro a alpha-MEM? Připadala v úvahu ještě jiná media? Zeptali jsme se jednoho ze spoluautorů, doc. MUDr. Tomáše Trče, Csc., z Ortopedické kliniky.
Použili jsme srovnání základů pro naše media alpha-MEM a CellGro. Alpha-MEM jako standardně používaný základ pro media pro růst MSCs jsme srovnali s mediem se základem CellGro jakožto media v té době schváleného v rámci EU pro klinické použití. To je to, co vlastně by mělo projekt ukončit. Naším cílem bylo vyvinout systém snadno kompatibilní s GMP a snadnější registraci této metody pro přípravu buněk k obecnému klinickému použití. V patentu PV 2006-49 je jako jeden z nároků zníměno, že náš způsob dodání suplementů by měl fungovat i s jinými základy médií.
-mk-
