Isolation of rat lung mast cells for purposes of one-week cultivation using novel Percoll variant Percoll PLUS.

Článek vzniknul na Ústavu fyziologie a obsahuje postup isolace žírných buněk modifikovaný pro dlouhodobou kultivaci a návod na jednoduchou týdenní kultivaci těchto buněk. Oba postupy zlepšují sterilitu a zpomalují nárůst zbytkově neoddělených buněk v tkáňové kultuře. Morfologické pozorování isolovaných a kultivovaných žírných buněk vedlo k podivnému závěru o nepřítomnosti nebo velmi malých morfologických rozdílech mezi hypoxickou a normoxickou frakcí kultivovaných buněk. Při následné biochemické analýze na modelové linii RBL2H3 blízké žírným buňkám byly identifikovány velmi malé buněčné membránové útvary označované exosomy jako možný důvod málo viditelných změn. Optickým mikroskopem jsou viditelné pouze aglomeráty exosomů přítomné v ojediněle značně zvětšených multivesikulárních tělíscích buněk. Výrazné morfologické změny byly naopak pozorovány při modelové alogení reakci dvou frakcí žírných buněk isolovaných z různých krys.
 
Hlavního autora článku, RNDr. Jaroslava Kubrychta, CSc., z Centra výzkumu chorob srdce a cév, jsme se zeptali, v čem se Percoll PLUS liší od dříve používaného Percollu.
Percoll PLUS je na rozdíl od původního Percollu mnohem více chemicky inertní, což je dáno nahrazením většiny slabých interkcí vytvářejících Percollové částice v původním Percollu interakcemi kovalentními. Místo několika měsíců můžete tak s Percollem PLUS pracovat při nejmenším déle než rok. S postupujícím časem od dat výroby by měl Percoll PLUS navíc zůstat méně adherentní než původní Percoll. Percoll PLUS můžete také bez obtíží (změny hustoty) nechat několik dní v mediu se sníženým obsahem séra (0.5–1 %), což jde s původním Percollem jen někdy. Percoll PLUS se také nerozkládá (nebo velmi omezeně rozkládá) při sterilizací, a lze ho tedy bez potíží opakovaně sterilizovat. Tento fakt je důležitý především pro předcházení rizika kontaminace právě při isolaci buněk pro kultivaci.
 
-mk-